联系我们
意见反馈

关注公众号

获得最新科研资讯

瑕瑜研究组-自由基生物质谱

简介

分享到

瑕瑜课题组发展反相液相色谱-在线光化学衍生-串联质谱新平台实现脂质异构体准确鉴定

近日,清华大学化学系瑕瑜课题组在Analytical Chemistry杂志上发表了题为“Enhanced Phospholipid Isomer Analysis by Online Photochemical Derivatization and RPLC-MS”的论文(Zhang et al. Anal. Chem. 2020, 92, 6719-6726),通讯作者为张文鹏博士和瑕瑜教授。在这项工作中,他们发展了含新型的流动相系统,建立在线RPLC-PB-MS/MS工作平台,在分离脂质同分异构体和同重体的同时实现C=C双键的鉴定。

                                          

随着脂质组学的发展,高通量及高灵敏的脂质精细结构分析成为了研究者关注的方向。脂质精细结构,如脂肪酸链的C=C双键位置和sn位置的确定是研究的难点之一。为了实现脂质双键信息的质谱解析,多种串联质谱方法被相继发展起来,包括臭氧诱导解离(OzID),紫外光解离(UVPD)等。在前期工作中,瑕瑜课题组发展了基于Paternò-Büchi (PB) 反应的衍生化方法,可对双键进行特异性修饰,与基于碰撞诱导解离(CID)的质谱方法联用,可从相关诊断离子信息中获得复杂样品中脂质的双键位置信息。他们进一步发展了基于亲水作用色谱(HILIC)-PB-MS/MS的方法,对牛肝提取物中超过200种甘油磷脂的双键位置进行了解析。然而,HILIC仅可实现脂质部分大类分离,对每个脂质亚类中的部分同分异构体和同重体的区分以及质谱鉴定依然存在困难。为了解决该问题,在本工作中,他们发展了含丙酮的反相色谱流动相体系和洗脱条件,利用反相色谱对脂质异构体强大的分离能力,提高PB-MS/MS对脂质鉴定的准确性。

为了实现脂质异构体有效分离和柱后光衍生反应效率的平衡,作者优化流动相条件为A, acetone/ACN (50/50, v/v, ammonium acetate 10 mM)和 B, ACN/water (60/40, v/v, ammonium acetate 10mM)。经过45分钟的梯度洗脱,牛肝脂质提取物中的磷脂可按照链长度和不饱和度的实现分离,柱后流经FEP管制成的反应器,经紫外光照射,与流动相中的丙酮发生在线光反应(20 s),最后采样串联质谱对双键位置信息进行鉴定。

该平台所实现的脂质异构体分离主要包括:a) 来自13C同位素的同重体分离,如PC 34:1和含有2个13C的PC 34:2;b) 来自diacyl和ether磷脂的同重体分离,如PC 35:1和PC-O 36:1;c) 顺式和反式双键的同分异构体分离,如PC 18:1 (9Z)_(9Z)和PC 18:1 (9E)_(9E)等。高效的脂质分离有利于进一步实现对异构体的定量分析,与HILIC-PB-MS/MS工作平台结合可以起到很好的互补效果,对于准确的脂质生物学研究和脂质标志物的鉴定具有重要意义。

 

本文编辑:赵  婧  审核:张文鹏

本文链接:https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.analchem.0c00690

本文引用:DOI:10.1021/acs.analchem.0c00690

创建: Aug 06, 2020 | 13:33

分享到: